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产品名称:

人类星形胶质瘤耐替莫唑胺细胞

产品型号:
更新时间: 2022-05-26
描述:251MG/TMZ+luc人类星形胶质瘤耐替莫唑胺细胞
1.细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,重发;
2.细胞污染问题,请在收到产品 3 天内,给我们提出真实的实验结果,核实后重发;
3.常温发货的细胞静置 2 小时后,干冰冻存发货的细胞复苏后 2 天后,绝大多数细胞未存活,
(需提供真实清晰的细胞状态照片),重发;

产品介绍

品牌自营品牌应用领域医疗卫生,化工,生物产业,制药

U251MG/TMZ+luc人类星形胶质瘤耐替莫唑胺细胞

Human astroglioma resistant temozolomide cells ,U251 MG/TMZ+luc

货号:YJ-h244(STR(U251MG鉴定))

价格: 3200.0

规格: 1*10 6

细胞介绍

该细胞由U251MG/TMZ细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。

细胞特性

1)来源:U251MG/TMZ

2)形态:上皮细胞样,贴壁生长

3)含量:>1*10 6细胞数

4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

5)用途:仅供科研使用。


细胞运输、保存及注意事项


复苏细胞

冻存细胞

包装

充液的T25细胞培养瓶

1mL冻存管

运输条件

常温

干冰

保存方式

75%酒精消毒瓶壁,置于37℃恒温细胞培养箱

-80℃冰箱中保存过夜后转入液氮/立即复苏

注意事项

1. 收到细胞后,若发现培养瓶破损、漏液及细胞有污染;或冻存管有破损,融化、漏液等,请立即拍照并联系我们。照片包括细胞培养瓶/冻存管外观,显微镜下细胞照片(100倍,200倍各2张);

2. 若收到的复苏细胞有少量细胞脱落、飘起,可能由于运输途中导致。请先于37℃恒温细胞培养箱中静置2~3h后,再进行处理;

3. 复苏细胞的充液培养基为不含药物的维持培养基,血清浓度较低,收到细胞后请及时更换为完全培养基;

4. 建议收到细胞后,首先进行扩增(至少3代),并冻存部分细胞以备用。

5. 细胞传代或冻存过程中,不可使用含有药物的培养基。

细胞培养试剂的配制

1TMZ药物的配制及保存

建议将TMZ药物配制成16mg/mL的母液:即使用1mL DMSO溶液溶解16mg TMZ药物,使其完全溶解。(若所购买的TMZ药物规格为10mg,则加入625uL DMSO溶液,待其完全溶解即为16mg/mL母液)

注意:可根据用量配置药物,并将药物分装保存,避免反复冻融导致药物失效。溶解后的TMZ4℃保存1周,-20℃保存1个月,-80℃保存6个月。

2)冻存液的配制

90%优质胎牛血清+10%DMSO,现用现配。

3)完全培养基的配制(推荐使用YJ-h244-001b

成分

体积/浓度

优质胎牛血清

10%

双抗

1%

16ug/mL TMZ

0.1%母液(16mg/mL

DMEM培养基

补充至所需体积

细胞培养条件

气相:空气,95%;二氧化碳,5%; 温度:37℃,培养箱湿度为70%~80%

细胞处理

1)冻存细胞的复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4~6mL完全培养基的离心管中混合均匀,1000rpm/min离心3~5min,弃去上清液。加入1mL完全培养基重悬细胞后,均匀铺于含6~8mL完全培养基的培养瓶(或皿)中,置于37℃恒温细胞培养箱中过夜培养。第二天显微镜下观察细胞生长情况,2~3day换液。

注意:细胞复苏过程中,不可使用含有药物的培养基。须在细胞完全贴壁,形态完全展开,生长状态稳定后,方可根据实验需要添加TMZ药物。若加药后细胞生长状态较为缓慢,可适当降低TMZ的浓度,或使用不含TMZ的完全培养基培养至细胞生长状态较好时,再更换为所需的TMZ浓度;

建议复苏细胞时始终穿戴防护手套和面罩,避免冻存管因温差较大而发生爆炸,造成人员伤害。

2)细胞传代(建议以同等底面积的培养瓶/皿按照12比例传代)

待细胞密度达到80%~90%时,即可进行传代培养。

弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1次,吸净残余的PBS

加入适当体积的0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25-1mL,其它培养器皿可覆盖培养底面即可),置于37℃培养箱中消化2~5min,显微镜下观察细胞细胞大部分变圆并脱落,即可轻拍培养瓶使细胞全部脱落。迅速拿回操作台,加入2倍体积的、含10%FBS的培养基中止消化。 

将细胞悬液移入离心管中,1000rpm/min离心5min,弃去上清液。

向细胞沉淀中加入1~2mL完全培养基重悬细胞,轻吹混匀。将细胞悬液按11的比例均匀铺于2个新的培养瓶/皿中,添加6~8mL完全培养基,置于37℃恒温细胞培养箱中培养。第二天显微镜下观察细胞生长情况,2~3day换液。

注意:细胞传代过程中,不可使用含有药物的培养基。须在细胞完全贴壁,形态完全展开,生长状态稳定后,方可根据实验需要添加TMZ药物。若加药后细胞生长状态较为缓慢,可适当降低TMZ的浓度,或使用不含TMZ的完全培养基培养至细胞生长状态较好时,再更换为所需的TMZ浓度。

3)细胞冻存

细胞冻存时,步骤同2)细胞传代的①~④,细胞计数后,加入配制好的细胞冻存液,重悬细胞,按照1×106 ~ 1×107个细胞/mL分配到一个冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。

将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80℃冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

细胞筛选

稳定转染luc的细胞,随细胞传代次数的增加,其luc荧光强度逐渐减弱。若要维持荧光强度,需加入嘌呤霉素进行筛选。

初次进行细胞筛选时,建议加入终浓度为1ug/mL嘌呤霉素的完全培养基维持培养,若无细胞漂浮或者漂浮较少,即可更换为含2ug/mL嘌呤霉素的完全培养基继续筛选,以此类推,至最高药物浓度为5ug/mL。若筛选过程中,漂浮细胞大于60%,则停止筛选,换成正常培养基培养,至细胞密度约80%,可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5ug/mL嘌呤霉素时细胞正常增殖,可停止筛选,用不含药完全培养基正常培养。

 251MG/TMZ+luc人类星形胶质瘤耐替莫唑胺细胞

 


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