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人永生化表皮细胞荧光素酶标记

产品型号:
更新时间: 2022-05-25
描述:HaCat+luc人永生化表皮细胞荧光素酶标记
细胞出现问题,可重发的情况有哪些?判定标准是什么?
1.细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,重发;
2.细胞污染问题,请在收到产品 3 天内,给我们提出真实的实验结果,核实后重发;
3.常温发货的细胞静置 2 小时后,干冰冻存发货的细胞复苏后 2 天后,绝大多数细胞未存活,
(需提供真实清晰的细胞状态照片),重发;

产品介绍

品牌自营品牌应用领域医疗卫生,化工,生物产业,制药

HaCat+luc人永生化表皮细胞荧光素酶标记

,HaCat luc

货号:YJ-0072a(STR(HaCat鉴定))

价格: 3200.0

规格: 1*10 6 

细胞介绍

该细胞源自一位62岁患有黑色素瘤男性的病灶外围正常皮肤,角蛋白、角化细胞交联外膜蛋白、中间丝相关蛋白阳性。

该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。

细胞特性

1 来源:正常表皮组织

2 形态:上皮细胞样,贴壁生长

3 含量:>1x106  细胞数

4 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途:仅供科研使用。

细胞筛选

该细胞为稳定转染Luc的细胞,随细胞传代次数的增加,其Luc荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度,可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。        

建议收到细胞后至少传3代,冻存留种后再进行筛选。

初次进行细胞筛选时,建议加入终浓度为1ug/ml嘌呤霉素的完全培养基维持培养,若无细胞漂浮或者漂浮较少,即可更换为含2ug/ml嘌呤霉素的完全培养基继续筛选,以此类推,至最高药物浓度为5ug/ml。若筛选过程中,漂浮细胞大于60%,则停止筛选,换成正常培养基培养,至细胞密度约80%,可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5ug/ml嘌呤霉素时细胞正常增殖,可停止筛选,用不含药完全培养基正常培养。

运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞

11mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

2T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

4备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶12传代 。

一.培养基及培养冻存条件准备

1 准备DMEM(推荐YJ-0001)培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%

2 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%

3 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

二.细胞处理:

1 冻存细胞的复苏:

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T251-2mLT752-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml10%FBS的培养基来终止消化。 

3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

2 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%

3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

4)该细胞在DMEM(1.5g/LNaHCO3)培养基中生长良好,大部分品牌的DMEM含有较高浓度的NaHCO33.7g/L),若使用DMEM3.7g/L NaHCO3)培养基培养细胞时需要提高CO2浓度(7%-10%)。

 


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