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产品名称:

SK-OV-3+luc人卵巢癌细胞荧光素酶标记

产品型号:
更新时间: 2022-05-25
描述:SK-OV-3+luc人卵巢癌细胞荧光素酶标记
1.细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,重发;
2.细胞污染问题,请在收到产品 3 天内,给我们提出真实的实验结果,核实后重发;
3.常温发货的细胞静置 2 小时后,干冰冻存发货的细胞复苏后 2 天后,绝大多数细胞未存活,
(需提供真实清晰的细胞状态照片),重发;
4.干冰冻存发货的细胞复苏后 2 天后或常温发货的细胞静

产品介绍

品牌自营品牌应用领域医疗卫生,化工,生物产业,制药

SK-OV-3+luc人卵巢癌细胞荧光素酶标记

,SK-OV-3/luc

货号:YJ-0081a(STR(SK-OV-3鉴定))

价格: 3200.0

规格: 1*10 6

细胞介绍

SK-OV-3G.TrempeL.J.Old1973年从卵巢肿瘤病人的腹水分离得到。 此细胞对肿瘤坏死因子和几种细胞毒性药物包括白喉毒素、顺铂和阿霉素均耐受。 在裸鼠中致瘤,且形成与卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。

该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。

细胞特性

1 来源:卵巢腺癌,腹水转移

2 形态:上皮细胞样  贴壁生长

3 含量:>1*10 6细胞数

4 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途:仅供科研使用。

细胞筛选

该细胞为稳定转染Luc的细胞,随细胞传代次数的增加,其Luc荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度,可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。        

建议收到细胞后至少传3代,冻存留种后再进行筛选。

初次进行细胞筛选时,建议加入终浓度为1ug/ml嘌呤霉素的完全培养基维持培养,若无细胞漂浮或者漂浮较少,即可更换为含2ug/ml嘌呤霉素的完全培养基继续筛选,以此类推,至最高药物浓度为5ug/ml。若筛选过程中,漂浮细胞大于60%,则停止筛选,换成正常培养基培养,至细胞密度约80%,可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5ug/ml嘌呤霉素时细胞正常增殖,可停止筛选,用不含药完全培养基正常培养。

运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞

11mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

2T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理

1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。

2)请在45X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。

3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶12传代 。

一.培养基及培养冻存条件准备

1 准备McCoy's 5A(推荐YJ-0011)培养基;优质胎牛血清,10%;双抗1%

2 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%

3 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

二.细胞处理:

1 冻存细胞的复苏:

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T251-2mLT752-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml10%FBS的培养基来终止消化。 

3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。SK-OV-3+luc人卵巢癌细胞荧光素酶标记

 


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