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人非小细胞肺癌细胞耐药亚株(A549/DDP)

产品型号:
更新时间: 2022-05-05
描述:收到细胞先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置 2 小时(视细胞密度而定)稳定细胞状态,(悬浮细胞不需要静置直接按照悬浮细胞步骤操作)。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时就整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100×,200×各 2 张),观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。

产品介绍

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人非小细胞肺癌细胞耐药亚株(A549/DDP)

货号:HRCL-031/DDP

细胞介绍

这株细胞是用药物剂量增选法筛选获得的A549细胞耐药亚株。

细胞特性

1) 来源:肺癌

2) 形态上皮细胞

3) 含量:>1x106 /mL

4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5) 规格:T75或者1mL冻存管包装

运输和保存:使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后,1000RPM常温条件离心5min洁净操作台弃去上清,加入推荐使用的培养基转移至10cm培养皿或者T75培养瓶中培养传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途:仅供科研使用。

                     

细胞培养步骤

一. 培养基培养冻存条件准备:

注意客户收到细胞后按照下面的要求操作:培养瓶里面的培养液是不含药物的。待细胞长到 70-80%的汇合度时,去掉培养液,加入含 500ng/ml DDP药物的培养液,放入培养箱,这段时间肯定会有小部分细胞悬浮起来,但是不要紧,通过换液可以去掉,下面的细胞待长满就可以消化传瓶了,这时可以一直用含药培养液来消化培养细胞,一两代之后可以将药物浓度提高到 800ng/ml,含药培养液用于细胞培养都没问题的,冻存的时候就不要在冻存液里面加药物了。

1) 准备1640培养基(Gibco)90%;优质胎牛血清,10%添加PS1%1~2ug/ml DDP

2) 培养条件 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度培养箱湿度为70%-80%

3) 冻存液90%完全培养基,10%DMSO现用液氮储存。

二. 细胞处理

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中加入8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%可进行传代培养

对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子PBS润洗细胞1-2

2. 2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA培养瓶中,置于37培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化

3. 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1215的比例分到新的8ml培养基的新皿中或者瓶中

3)细胞冻存:细胞生长状态良好时,进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO进行冻存

注意事项:

1. 收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系

2. 所有动物细胞均视为潜在的生物危害性必须在二级生物安全内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。



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