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凋亡因子Caspase-389检测实验

产品型号:
更新时间: 2022-03-29
描述:提供商: 杭州研谨生物
服务名称: 凋亡因子Caspase-389实验
规格: 实验服务
价格: 500元
周期: 10天左右
收费标准/服务周期/提供结果:
欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。
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产品介绍

品牌其他品牌产地类别进口
应用领域医疗卫生,生物产业

凋亡因子Caspase-389检测实验

 

Caspase3

Caspase- -个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase3也称CPP32, 是细胞凋亡过程中的一个关键酶,可以剪切procaspase2.6. 79,并可以直接特异性剪切许多caspase底物,包括PARP (poly(ADP-ribose) polymerase), ICAD (Inhibitor of caspase-activated Deoxyri- bonuclease), gelsolinfodrin等。 这些由caspase 3介导的蛋白剪切是细胞凋亡分子机制的重要组成部分。caspase 3在细胞核凋亡过程中也起到了关键作用,包括染色质固

缩,DNA片段化等。同时caspase 3对细胞起泡(Cell blebbing)也起到关键作用。

检测原理基于casepase 3可以催化底物AC-DEVD-pNA产生黄色的pNA(-itroaniline),从而可以通过测定吸光度来检测caspase 3的活性。pNA405nm附近有强吸收。参照黄色产物pNA制作的标准曲线,可以作为定量caspase 3酶活性的标准品。

 

Caspase-8

Caspase 8通常以酶原的形式存在,在细胞凋亡的信号转导过程中被激活,Caspase 8被认为是细胞凋亡信号转导过程中上游的caspase,Fas-receptorTNFR-1介导的细胞凋亡 过程中caspase 8被激活,形成一个由p18p10组成的二聚体,进一步激活下游的caspase 4, caspase 6caspase 9caspase 10。本方法基于Caspase 8可以催化底物AC-IETD-pNA产生黄色的pNA (-nitraniline),从而可以通过测定吸光度来检测Caspase 8的活性。pNA405nm附近有强吸收。 检测样本的405nm OD值参照pNA制作的标准曲线,可以计算样品的Caspase 8酶活性。

 

Caspase-9

Caspase 9也称ICE-LAP6Mch6,是细胞凋亡信号转导过程中上游的caspase。线粒体释放细胞色素c以后,caspase 9可以和细胞色素c以及Apaf1形成复合物,同时被激活。激活的caspase 9可以激活细胞凋的最关键酶caspase 3,从而促进后续的细胞凋亡信号。Caspase 9的激活可以通过磷酸化进行调控。

 

本方法基于Caspase 9可以催化底物Ac- LEHD -pNA产“生黄色的pNA (p-nitroaniline),从而可以通过测定吸光度来检测

 

Caspase 9的活性。pNA405nm附近有强吸收。检测样本的405nm OD值参照pNA制作的标准曲线,可以计算样品的Caspase 9酶活性。

Caspase1

Caspase2

Caspase4

Caspase6

 

凋亡因子Caspase 3/8/9检测样本准备:

1)细胞样品:1x107个细胞(1T25的培养瓶细胞量) , 600g 4°C离心5分钟收集细胞,小心吸除上清,PBS洗涤一次。吸取上清后,每管细胞样品加入100u|裂解液重悬沉淀,冰浴裂解15分钟。4°C 16,000g离心10-15分钟, 把上清转移到冰浴预冷的离心管中。立即测定caspase 3的酶活性或-70°C保存样品。同时可以取少量样品用Bradford法测定蛋白浓度,尽量使蛋白浓度达到1-3mg/ml.

2)组织样品:约每10mg组织加入100ul裂解液,在冰浴上用玻璃匀浆器匀浆。然后把匀浆液转移到1 .5ml)离心管中,冰浴再裂解5分钟。4°C 16,000g离心10-15分钟,把上清转移到冰浴预冷的离心管中。立即测定caspase 3的酶活性或-70°C保存

样品。同时可以取少量样品用Bradford法测定蛋白浓度,尽量使蛋白浓度达到1-3mg/ml.

Caspase-3活性检测标准曲线

 

实验周期: 7-10个工作日内完成,重复检测优惠。

客户注意事项

1.抗体:事先咨询上海研谨生物,明确抗体种属以及是否有该抗体可使用。如无可由双方协商而定,客户自己购买提供或我公司代购;

2.标本收集与保存:

①组织样品:新鲜组织放入液氮或-70度保存,组织不少于100mg (约绿豆大小) ;

②培养细胞:通过细胞计数取不少于000000个细胞于EP管,加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂,混匀后保存于冰箱(-70°C,避免反复冻融) ;

③血液细胞标本:以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂,保存(-70°C可长期保存,避免反复冻融)

④血清或细胞培养液标本:离心去掉杂质后取上清入EP管,保存(以上4°C可保存15-20天,-70°C可长期保存,避免反复冻融)

3、样本运输:可选以下任何的一种方式寄送标本

①组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后加冰袋运输;

②细胞样本也可以直接快件寄送培养瓶(密封保证不污染,培养液不漏出,细胞不要长得太满,50%左右,灌满培养液) ;

③血清或上清液直接加冰袋寄送(密封保证液体不漏出,视路途远近2-3天可到达)

 

 

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