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产品名称:

探针合成实验服务

产品型号:
更新时间: 2022-03-28
描述:提供商: 杭州研谨生物
服务名称: 探针合成实验服务
规格: 实验服务
价格: 3000元
我们致力于在生命科学领域、生物医学实验外包及论文润色服务,协助客户各类实验服务及论文润色,是您值得信赖的科研合作伙伴!
如果您受时间、试验条件等限制而无法完成您的课题研究,欢迎您与我们联系。

产品介绍

品牌其他品牌产地类别进口
应用领域医疗卫生,生物产业

探针合成实验服务

 

 

 探针是- -小段单链DNA或者RNA片段(大约是20500 bp), 用于检测与其互补的核酸序列。双链DNA加热变性成为单链,随后用放射性同位素(通常用磷-32)、萤光染料或者酶 (如辣根过氧化物酶)标记成为探针。

 

实验材料

基因

 

试剂、试

剂盒

 

转录缓冲液DTT RNA酶抑制剂CTP ATP S-UTP乙酸铵乙醇

 

仪器、耗

 

水溶锅、离心机、培养箱、烘箱

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

实验步骤

1.在一个含SP6. T3T7启动子的载体中,插入目的基因。在编码序列下游酶切使质粒呈线

性。DNAL以酚/0仿抽提, 乙醇沉淀,70%乙醇洗后晾干。以无菌水重溶沉淀至1 ug/ul

2.室温配置如下反应混合液(总体积20μl) :

(1) 4.0 ul 5x转录缓)冲液

(2) 0.2 ul 1 mol/ DTT

(3) 60 U RNA酶抑制剂

(4) 1.0 ul三种10 mmol/l NTP中的每-

(5) 1.0 ul 1 ug/ul酶切DNA

(6) 10.0μ ζ[35s] UTP

(7) 16 U SP6T7 RNA聚合酶

(8) 37*C温育30 min,再加16 U聚合酶并于37 °C温育40 min

3.在反应混合液中加入: 60 U RNA酶抑制剂,20 μl 10 mg/ml的载体RNA1.0μl1,37°C温育10 min以除去摸板。

4.往反应混合液加入以下液体: 0.8 ul 1 mol/l DTT. 63 μul 无菌水和10 μI3 mol/l乙酸钠,取出1 ul测定其cpm/ul值。

5.36.4μ7.5 molM的乙酸铵于反应混合液(终浓度2 mol/)50~100 ug tRNA载体和272ul冷无水乙醇,置干冰上沉淀10 min,以冷70%乙醇洗沉淀,晾干,需要的话可重复此步。以100μl 10 mmol/l DTT重溶DNA沉淀。

 

6.确定其cpm/μl值, 并计算掺入百分比,核糖核酸探针应于2~3天内使用。

(70%90%的标记掺入,结果可得70~90 ng标记的RNA)

 

 

 

 

收费标准/服务周期/提供结果:

欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。

更多实验技术服务请浏览网站其他内容,或来电详询!

 


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