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实时荧光定量PCR

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更新时间: 2022-06-23
描述:实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩 增产物量的变化,通过Ct值和标准曲

产品介绍

品牌其他品牌产地类别进口
应用领域医疗卫生,生物产业

 

<strong><strong>实时荧光定量PCR</strong></strong>实验 小图.jpg

 

提供快捷高效的实时荧光定量PCR(Real TIme PCR,RT PCR)服务,所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。是一个常用的mRNA水平的基因表达定量技术。

服务内容

细胞组织的基因差异表达检测,经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如药物处理、物理处理、 化学处理等),特定基因在不同时段的表达差异以及cDNA芯片或差显结果的确证。

组织/细胞样品中基因拷贝数的确定,DNARNA的相对和绝对定量分析。包括病原微生物或病毒含量的检测,转基因动植物转基因拷贝数的检测,RNAI基因失活率的检测等。基因分型,基因突变及多态性方面的研究。

技术原理

Real-time PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩 增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。荧光定量PCR技术具有特异性强,有效解决了PCR污染问题、自动化程度高等特点,做到PCR每循环一次就收集一个数据,建立实时扩增曲线,准确地确定Ct值,从而根据Ct值确定起始DNA拷贝数。做到了真正意义上的DNA定量。

技术流程

一、RNA的提取

二、DNase I消化样品RNA中的DNA

三、RNA琼脂糖凝胶电泳

四、RNA反转录为cDNA

Real-Time PCR弓物设计的要求

Tm=55~65 °C

GC=30~80%

PCR扩增产物长度:引物的产物大小不要太大,一般在80~300 bp之间都可。

④引物的退火温度要高,-般要在60 °C以上。

五、cDNA与引物质量检测

选择特异性好。扩增效率高的引物作为实时荧光使用引物。

六利用相对定量的方法分析目的基因表达量的情况:

常用的看家基因有B-actin, GAPDH, 188 rRNA

七、定量PCR检测

八扩增曲线和溶解曲线

溶解曲线全部为单峰表明为特异性扩增,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平台期。

收费标准/服务周期/提供结果:

欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。

更多实验技术服务请浏览网站其他内容,或来电详询!

 

 

 

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