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产品介绍
| 品牌 | 自营品牌 | 产地类别 | 国产 |
|---|---|---|---|
| 应用领域 | 医疗卫生,生物产业 |
实验技术简介: SILAC代谢标记定量实验服务的基本原理是分别用天然同位素(轻型)或稳定同位素(重型)标记的必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸，细胞经5-6个倍增周期后，稳定同位素标记的氨基酸*掺入到细胞新合成的蛋白质中替代了原有氨基酸。不同标记细胞的裂解蛋白按细胞数或蛋白量等比例混合，经分离、纯化后进行质谱鉴定，根据一级质谱图中两个同位 素型肽段的面积比较进行相对定量。属于体内代谢标记法。
实验操作流程:
1、蛋白提取和样品制备
2、标记效率测试
3、样品混台
4、SDS-PAGE分级
5、酶解
6、质谱鉴定
7、软件分析
8、定性定量蛋白质组结果
9、生物信息学数据挖掘和统计分析
实验注意事项:
客户提供:
1、蛋白质提取物: 浓度>1μg/ul, 蛋白质总量>300μg.
2、细胞:通过细胞计数取不少于2x106个细胞于EP管，加入0 5ml生理盐水或蛋白保护剂，混匀后保存于冰箱(-80°C， 避免反复冻融)。
交付标准:
1、蛋白质鉴定和SIL AC定量分析结果;
2、客户特定蛋白质对应的质谱峰图;
3、SIL AC实验完整的实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。
其他:
1、SILAC是体内标记技术，稳定同位素标记的氨基酸与天然氨基酸化学性质基本相同，所标记的细胞和未标记细胞在生物学行为上几乎没有差异，标记效率可高达100%。
2、采用质谱定量,定量结果准确且批次变异小、重复性好。
3、体内代谢标记与SDS- PAGE或色谱分离技术相结合，兼容疏水性蛋白和偏碱性蛋白，不受蛋白性质限制。
4、多个样品混合后同时进行分离、酶切和鉴定,后续实验对样品的影响一致， 减少了实验操作和仪器设备产生的影响。
5、由于该技术属于体内标记，标记效果稳定，其标记效率不受裂解液的影响，不仅适合于进行全细胞蛋白的分析，还适合于膜蛋白的鉴定和定量。
6、与化学标记相比，SIL AC方法蛋白需要量明显减少，通常每个样品只需要几十微克的蛋白量。
7、活体标记，更接近样品真实状态。
8、只适用于活体培养的细胞，对于生物医学研究中常用的组织样品，体液样品等无法分析,对于动物模型的标记成本太大，无法实现。与体外标记技术相比，SIL AC属于体内标记，具有以下技术优势
1、高通量，可同时鉴定并定量数百至数千种蛋白质;
2、定量精确，降低由于样品制备不同而造成的实验差异;
3、线性定量范围广;
4、灵敏度更高，蛋白质需要量明显减少;
5、标记采用的是体内标记技术，更接近样品真实状态。
SILAC技术服务内容
1、细胞同位素标记;
3、SDS-PAGE分离;
4、胰酶酶切后液相分离和质谱分析;
5、数据库检索及蛋白质定量分析;
6、差异蛋白的生物信息学分析;
7、实验报告提交。
实验服务报告内容
1、蛋白定鉴定和SIL AC定量分析结果;
2、顾客Z定蛋白质对应的质谱峰图;
3、SIL AC实验完整的实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。
SILAC代谢标记定量实验服务优势
1、灵敏度高，检测限低，可检测出低丰度蛋白;
2、分离能力强，分析范围广，iITRAQ可以对任何类型的蛋白质进行分离鉴定，包括高分子量蛋白质、酸性蛋白和碱性蛋白，膜蛋白和不溶性蛋白;
3、高通量:同时对8个样本进行分析，提高了实验通量，可同时对多个时间点或不同处理的蛋白质进行分析;
4、结果可靠:定性与定量分析结果更加可靠;
5、自动化程度高:液相与质谱连用，自动化操作，分析速度快，分离效果好。
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