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SILAC代谢标记定量实验服务

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更新时间: 2022-04-24
描述:SILAC代谢标记定量实验服务的基本原理是分别用天然同位素(轻型)或稳定同位素(重型)标记的必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸,细胞经5-6个倍增周期后,稳定同位素标记的氨基酸完全掺入到细胞

产品介绍

品牌自营品牌产地类别国产
应用领域医疗卫生,生物产业
  实验技术简介: SILAC代谢标记定量实验服务的基本原理是分别用天然同位素(轻型)或稳定同位素(重型)标记的必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸,细胞经5-6个倍增周期后,稳定同位素标记的氨基酸完全掺入到细胞新合成的蛋白质中替代了原有氨基酸。不同标记细胞的裂解蛋白按细胞数或蛋白量等比例混合,经分离、纯化后进行质谱鉴定,根据一级质谱图中两个同位 素型肽段的面积比较进行相对定量。属于体内代谢标记法。
 
  实验操作流程:
 
  1、蛋白提取和样品制备
 
  2、标记效率测试
 
  3、样品混台
 
  4、SDS-PAGE分级
 
  5、酶解
 
  6、质谱鉴定
 
  7、软件分析
 
  8、定性定量蛋白质组结果
 
  9、生物信息学数据挖掘和统计分析
 实验流程图.jpg
  实验注意事项:
 
  客户提供:
 
  1、蛋白质提取物: 浓度>1μg/ul, 蛋白质总量>300μg.
 
  2、细胞:通过细胞计数取不少于2x106个细胞于EP管,加入0 5ml生理盐水或蛋白保护剂,混匀后保存于冰箱(-80°C, 避免反复冻融)。
 
  交付标准:
 
  1、蛋白质鉴定和SIL AC定量分析结果;
 
  2、客户特定蛋白质对应的质谱峰图;
 
  3、SIL AC实验完整的实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。
 
  其他:
 
  1、SILAC是体内标记技术,稳定同位素标记的氨基酸与天然氨基酸化学性质基本相同,所标记的细胞和未标记细胞在生物学行为上几乎没有差异,标记效率可高达100%。
 
  2、采用质谱定量,定量结果准确且批次变异小、重复性好。
 
  3、体内代谢标记与SDS- PAGE或色谱分离技术相结合,兼容疏水性蛋白和偏碱性蛋白,不受蛋白性质限制。
 
  4、多个样品混合后同时进行分离、酶切和鉴定,后续实验对样品的影响一致, 减少了实验操作和仪器设备产生的影响。
 
  5、由于该技术属于体内标记,标记效果稳定,其标记效率不受裂解液的影响,不仅适合于进行全细胞蛋白的分析,还适合于膜蛋白的鉴定和定量。
 
  6、与化学标记相比,SIL AC方法蛋白需要量明显减少,通常每个样品只需要几十微克的蛋白量。
 
  7、活体标记,更接近样品真实状态。
 
  8、只适用于活体培养的细胞,对于生物医学研究中常用的组织样品,体液样品等无法分析,对于动物模型的标记成本太大,无法实现。与体外标记技术相比,SIL AC属于体内标记,具有以下技术优势
 
  1、高通量,可同时鉴定并定量数百至数千种蛋白质;
 
  2、定量精确,降低由于样品制备不同而造成的实验差异;
 
  3、线性定量范围广;
 
  4、灵敏度更高,蛋白质需要量明显减少;
 
  5、标记采用的是体内标记技术,更接近样品真实状态。
 
  SILAC技术服务内容
 
  1、细胞同位素标记;
 
  3、SDS-PAGE分离;
 
  4、胰酶酶切后液相分离和质谱分析;
 
  5、数据库检索及蛋白质定量分析;
 
  6、差异蛋白的生物信息学分析;
 
  7、实验报告提交。
 
  实验服务报告内容
 
  1、蛋白定鉴定和SIL AC定量分析结果;
 
  2、顾客Z定蛋白质对应的质谱峰图;
 
  3、SIL AC实验完整的实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。
 
  SILAC代谢标记定量实验服务优势
 
  1、灵敏度高,检测限低,可检测出低丰度蛋白;
 
  2、分离能力强,分析范围广,iITRAQ可以对任何类型的蛋白质进行分离鉴定,包括高分子量蛋白质、酸性蛋白和碱性蛋白,膜蛋白和不溶性蛋白;
 
  3、高通量:同时对8个样本进行分析,提高了实验通量,可同时对多个时间点或不同处理的蛋白质进行分析;
 
  4、结果可靠:定性与定量分析结果更加可靠;
 
  5、自动化程度高:液相与质谱连用,自动化操作,分析速度快,分离效果好。
 
 

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