网状纤维染色银染

网状纤维染色银染实验服务

实验技术简介:网状纤维(reticular fiber)网状纤维在疏松结缔组织中含量较少,纤维较细，有分支,彼此交织成网状。用浸银法可将纤维染成黑色，故又称嗜银纤维(argyrophilic fiber)。电镜观察，网状纤维具有等间距的横纹结构，其化学成分也是胶原蛋白，和胶原纤维相似。网状纤维的嗜银性是由于包在原纤维上的糖蛋白所致。

实验技术原理:氨银液被组织吸咐与组织中的蛋白结合，经甲醛还原成黑色的金属银沉积于组织内及表面。用氯化金调色后，再用硫代硫酸钠液洗去未还原的银盐,从而将组织内的网状纤维清晰地显示出来。

实验操作流程:

1、切片脱蜡至水，蒸馏水洗,

2、用0.5%高 锰酸钾氧化5min,

3、自来水洗，继用蒸馏水洗,

4、用2%草酸漂白切片2min,

5、自来水洗，蒸馏水洗,

6、2%硫酸铁铍媒染5min,

7、水洗，蒸馏水洗,

8、滴入氨性银溶液浸染3 -5min,

9、蒸馏水洗数次,

10、 10%甲醛液还原5-10min,

11、水洗2min,

12、用核固红染色10-15min,

13、水洗10min, 各级酒精脱水,

14、 常规透明，中性树胶封固。

结果:网状纤维黑色，核红色,胶原纤维黄棕色。

实验注意事项:

客户提供:

1、组织样品:新鲜组织放入液氮或80度保存，组织不少于100mg;

2、培养细胞:通过细胞计数取不少于2x106个细胞于EP管,加入0 .5ml生理盐水或蛋白保护剂，沟后保存于冰箱(-80°C, 避免反复冻融) ;

3、血液细胞标本:以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入05ml生理盐水或蛋白保护剂,保存(-80°C可长期保存,避免反复冻融) ;

4、血清或细胞培养液标本:离心去掉杂质后取上清入EP管,保存(49C可保存15-20天, -80°C可长期保存，避免反复冻融) ;

5、石蜡切片，冰冻切片以及细胞爬片，涂片等。

6、样本运输:可选择以下任何一种方式寄送标本

组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后，加冰袋寄送;

细胞样本也可直接寄送培养瓶(密封保证不污染、培养液不漏出) ;

血清或上清液直接加冰袋寄送(视快递时效一般控制在2-3天内)，

交付标准:

1、图片;

2、完整项目报告(材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果)。

其他:

1、所使用的玻璃仪器，须用清洁液处理。

2、配制氨银溶液时，氨水加入的量不能过多或不足，过多感应下降，会使液体过碱，滴染时，切片容易脱落，过少则感应上升，浸染效果不佳，不好掌握。

3、配制氨银液时，有可能用玻璃蒸馏水。

4、使用的化学试剂应尽量用分析纯以上。

5、切片氧化漂白应*，不能使残存的福尔马林留于片上，否则将导致过早还原而使浸染不均匀。

6、如果有某种原因而导致切片脱落时，应使用涂胶的载片，以增加附贴性。

7、如有可能，氨银溶液以新配为佳，但也可保存于4°C冰箱中达一 个月左右,这种液体易挥发，用后即须盖紧，当沉淀物出现时，该溶液应抛弃。

8、应秀氯化金调色时，可将胶原纤维着染的黄棕色去除掉。

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