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石蜡冰冻切片TUNEL凋亡荧光

产品型号:
更新时间: 2022-04-24
描述:提供商: 杭州研谨生物
服务名称: 石蜡冰冻切片TUNEL凋亡荧光
规格: 实验服务
周期: 1-2周
价格: 15元
收费标准/服务周期/提供结果:
欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。
更多实验技术服务请浏览网站其他内容,或来电详询!

产品介绍

品牌自营品牌应用领域医疗卫生,生物产业

TUNEL凋亡荧光实验原理

dUTP缺口末端标记(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling,TUNEL) 法检测细胞凋亡的原理是当细胞发生凋亡时,DNA内切酶被激活,核小体间的基因组DNA被切断,暴露的3-0H可以在末端脱氧核苷酸转移酶(TerminalDeoxynucleotidyl Transferase, TdT)加上带有荧光素FITC标记的dUTP,从而可以通过荧光显微镜进行检测。


TUNEL凋亡荧光实验意义

1.TUNEL法是一种分子生物学与形态学相结合的研究方法,可对完整的单个凋亡细胞或者凋亡小体进行原位染色,可以准确反映细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征。

2.石蜡冰冻切片TUNEL凋亡荧光可用于石蜡切片、冰冻切片、培养的细胞等进行细胞凋亡检测,灵敏度远比一般的组织化学和生物化学方法要高。

3.操作简便快捷,在细胞凋亡的研究中被广泛采用。


TUNEL凋亡荧光实验步骤:

1.石蜡切片TUNEL显色法:

①石蜡切片常规脱蜡至水,脱蜡剂= =甲苯,至水剂乙醇;

②PBS漂洗3*5 min; .

③加入蛋白酶K工作液379C反应15-30 min, PBS漂洗3x5 min;

④4%多聚甲醛(pH7 4的PBS)室温固定15-30 min, PBS漂洗3x5 min;

⑤浸入封闭液(3%H202)室温封闭10 min, PBS漂洗3x5 min;

⑥参考使用试剂盒的说明书配制适量的TUNEL检测液,其中含有TdT酶、荧光标记液、TUNEL检测液;

⑦样品上加入适量TUNEL检测液,37°C避光孵育60 min, PBS漂洗3x5 min;

⑧选择是否用DAPI复染细胞核;

⑨使用抗荧光淬灭封片液封片后在荧光显微镜下进行观察。


2.冰冻切片TUNEL显色法:

①新鲜组织经处理后,立即在恒冷冰冻切片机内切片,厚度为5~6 um;

②防脱玻片,贴片,室温阴干约12h;③4%多聚甲醛(pH7 .4的PBS)室温固定10 min,

PBS漂洗3x5 min;

④浸入封闭液(3%H20O2) 室温封闭10 min, PBS漂洗3x5 min;

⑤浸入通透液(0.1%Triton X-100溶于PBS中),室温通透30 S-2 min;

⑥参考使用试剂盒的说明书配制适量的TUNEL检测液,其中含有TdT酶、荧光标记液、TUNEL检测液;

⑦样品上加入适量TUNEL检测液,37°C避光孵育60 min, PBS漂洗3x5 min;

⑧选择是否用DAPI复染细胞核:

⑨使用抗荧光淬灭封片液封片后在荧光显微镜下进行观察。


结果展示



结果展示.png



石蜡冰冻切片TUNEL凋亡荧光实验完成周期及交付标准

1.实验周期: 1-2周

2.交付标准:蜡块、切片、染色图片.实验报告(实验步骤、试剂、耗材等)


需确认的信息

1.样本的种属

2.样本的类型(固定的组织or蜡块or切片)

3.是否提供试剂盒

4.拍照要求




 

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