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石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡

产品型号:
更新时间: 2022-06-23
描述:石蜡切片可用于石蜡切片冰冻切片培养的细胞等进行细胞凋亡检测,灵敏度远比一般的组织化学和生物化学方法要高。操作简便快捷,在细胞凋亡的研究中被广泛采用。

产品介绍

品牌自营品牌应用领域医疗卫生,生物产业
  TUNEL凋亡显色法
 
  TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理是当细胞发生凋亡时,DNA内切酶被激活,核小体间的基因组DNA被切断,暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)加上带有生物素(Biotin) 标记的dUTP即Bitin-dUTP.,随后于辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的streptavidin结合, 在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞,从而可以通过普通光学显微镜检测到细胞凋亡。
 
  实验意义
 
  1. TUNEL法是一种分子生物学 与形态学相结合的研究方法,可对完整的单个凋亡细胞或者凋亡小体进行原位染色,可以准确反映细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征。
 
  2.石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡可用于石蜡切片冰冻切片培养的细胞等进行细胞凋亡检测,灵敏度远比一般的组织化学和生物化学方法要高。
 
  3.操作简便快捷,在细胞凋亡的研究中被广泛采用。
 
  实验步骤
 
  1.石蜡切片TUNEL显色法:
 
  ①石蜡切片常规脱蜡至水,脱蜡剂二甲苯,至水剂乙醇;
 
  ②PBS漂洗3*5 min; .
 
  ③加入蛋白酶K工作液37°C反应15-30 min, PBS漂洗3x5 min;
 
  ④4%多聚甲醛(pH7 .4的PBS)室温固定15-30 min, PBS漂洗3x5 min;
 
  ⑤浸入封闭液(3%H202)室温封闭10 min, PBS漂洗3x5 min;
 
  ⑥加入适量TdT酶反应液,暗湿盒中37°C反应1 h,用SSC室温15 min终止反应后,PBS漂洗3x5 min; .
 
  ⑦浸入0.3% H202封闭内源性过氧化物酶活性,室温孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;
 
  ⑧滴加Streptavidin-HRP工作液,37*C反应30-60 min, PBS漂洗3x5 min;
 
  ⑨滴加DAB显色液后用去离子水漂洗数次;
 
  10.选择是否用DAPI复染细胞核;
 
  脱水、透明、中性树胶封片后进行观察。
 
  2.冰冻切片TUNEL显色法:
 
  ①新鲜组织经处理后,立即在恒冷冰冻切片机内切片,厚度为5~6 um;
 
  ②防脱玻片,贴片,室温阴干约12 h;
 
  ③4%多聚甲醛(pH7 4的PBS)室温固定10 min, PBS漂洗3x5 min;
 
  ④浸入封闭液(3%H202)室温封闭10 min, PBS漂洗3x5 min;
 
  ⑤浸入邇透液(0.1% Triton X-100溶于PBS中),室温通透30 S-2 min;
 
  ⑥加入适量TdT酶反应液,暗湿盒中37°C反应1 h,用SSC室温15 min终止反应后,PBS漂洗3x5 min; .
 
  ⑦浸入0.3% H2O2封闭内源性过氧化物酶活性,室温孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;
 
  ⑧滴加Streptavidin-HRP工作液,379C反应30-60 min, PBS漂洗3x5 min;
 
  ⑨滴加DAB显色液后用去离子水漂洗数次:
 
  @选择是否用DAPI复染细胞核;
 
  脱水、透明、中性树胶封片后进行观察。
 
结果展示.png
石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡实验完成周期及交付标准
 
  1.实验周期: 1-2周
 
  2.交付标准:蜡块、切片、染色图片.实验报告(实验步骤、试剂、耗材等)
 
  需确认的信息
 
  1.样本的种属.
 
  2.样本的类型(固定的组织or蜡块or切片)
 
  3.是否提供试剂盒
 
  4.拍照要求
 
  收费标准服务周期提供结果:
 
  欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。
 
  更多实验技术服务请浏览网站其他内容,或来电详询!
 
 

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