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产品名称:

碱性磷酸酶染色实验服务

产品型号:
更新时间: 2022-03-10
描述:提供商: 杭州研谨生物
服务名称: 碱性磷酸酶染色实验服务
规格: 样本
实验周期: 3周
说明: 含包埋切片、拍照
价格: 60元
收费标准/服务周期/提供结果:
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产品介绍

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碱性磷酸酶染色实验服务

 

 

碱性磷酸酶染色实验技术简介:

碱性磷酸酶(AKP) 的显示方法zui早由Gomeri (1939) 提出,现在这种方法称为Gomeri法。碱性磷酸酶是指磷酸单酯酶I,它能在pH8. 6~10.0的zui适条件下分解磷酸单酯,对于与磷酸相接的醇基没有特异性,Gomeri法是让该酶在碱性条件下,分解甘油磷酸钠,产生磷酸根。

碱性磷酸酶染色实验技术原理:

在一定条件下,使细胞中的酶作用于酶的底物,使其产物在原地进行捕捉、沉淀转化为有色产物。细胞组织中的碱性磷酸酶在碱性(PH9.0- 9.6)环境下使作用液中的底物(a- 磷酸萘酚钠)水解,产生出a蔡酚,然后再与偶氮盐偶联,生成不溶性的耐晒染料(zui终产物的颜色因所用偶氮盐的品种不同而有所不同)。

实验操作流程:

1、取材、固定、包埋、切片;

2.取已粘好烘干的切片两块,放入二甲苯(一)→二甲苯(二) (各3-4分钟) 的染缸中进行脱蜡,再经100%乙醇(一)- +100%乙醇(二) - -95%乙醇- -90%乙醇- -70%乙醇- -30%乙醇- +z水。 每级各一分钟,在移切片时,用镊子夹住切片震荡并提起,放下反复几次,在移入下-染缸边緣前稍停留。让溶液滴净后,再入下一染缸,以免把上一染缸溶液过多带入下-染缸,而影响切片质量;

3.将其中一块切片以蜡笔作-标记(用作对照组切片),放入沸水中煮沸5分钟;

4.将两块切片均放入AKP作用液中孵育30-60分钟,作用液要事先预热到37"C,水浴中进行:

5、取出切片在蒸馏水中洗涤;

6、放入硝酸钴溶液2-3分钟;

7.蒸馏水冲洗干净,否则切片易被污染,影响定位;

8、切片浸入硫化铵中2-3分钟;

9.蒸馏水冲洗干净;

10.经各级酒精脱水。即30%乙醇- -70%乙醇- -90%乙醇- -950%乙醇- -100%乙醇 (二)- -100%乙醇 (一),各级一分钟在显微镜下观察,细胞中有黑色沉淀存在的地方,就表明有酶的存在。煮沸的对照切片无黑色沉淀。


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