染色质免疫沉淀技术包括哪三个独立的步骤？

时间：2022-08-03 浏览次数：200

　　染色质免疫沉淀是一种用来研究生理状态下基因组内部蛋白质-DNA 相互作用的研究技术。是目前研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质－DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与DNA 相互作用的信息。

　　染色质免疫沉淀技术包括三个独立的步骤：

　　1.固定，即在体内用甲醛固定DNA和蛋白质复合物，然后用化学（微球菌酶）或者机械（超声波）的手段将其随机切成一定长度的染色质小片段。

　　2.免疫沉淀，即利用目的蛋白质或者目的蛋白质上标签的特异性抗体，通过抗原和抗体反应形成DNA-蛋白质－抗体复合体，然后沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段。

　　3.目的片段的纯化与检测，即经过热处理解交联，释放共沉淀的DNA；再将DNA片段纯化后，对沉淀的DNA样品进行检测。

　　染色质免疫沉淀实验流程：

　　甲醛处理细胞→收集细胞，超声破碎→加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白-DNA复合物相互结合→加入ProteinA，结合抗体-靶蛋白-DNA复合物，并沉淀→对沉淀下来的复合物进行清洗，除去一些非特异性结合→洗脱，得到富集的靶蛋白-DNA复合物→解交联，纯化富集的DNA-片断→PCR分析。

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