产品分类

您的位置:首页 > 技术文章 > 禽流感病毒(H5N1)抗体检测原理及操作步骤

技术文章

禽流感病毒(H5N1)抗体检测原理及操作步骤

时间:2022-05-19 浏览次数:183

禽流感病毒(H5N1)抗体检测试剂盒

 

 

介绍

禽流感病毒(H5N1)抗体检测试剂盒检测鸡血清中的流感病毒H5N1抗体,用于评估养鸡场鸡流感疫苗免疫状况及感染鸡的血清学辅助诊断。

本试剂盒采用间接ELISA法,在酶标板微孔上预包被流感H5N1抗原。在试验中,加入稀释后的待检血清,经过温育后,若样品中含有流感H5N1特异性抗体,则与包被板上的抗原结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后;加入酶标二抗,与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶结合物;在微孔中加入TMB底物液,经酶催化形成蓝色产物,加入终止液终止反应后,用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。

 

需自备的设备及试剂

1.    微量移液器: 0.5µl~10µl、10µl~100µl、100µl~1000µl。

2.    一次性移液器吸头。

3.    量筒:500ml。

4.    96孔板酶标仪。

5.    蒸馏水或去离子水。

6.    洗瓶或洗板机。

 

样品制备

取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。

 

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

 

样品的稀释

在血清稀释板中按1:101的体积比稀释待检血清(例如:200μl样品稀释液中加2μl待检血清)。

注意:阴性和阳性对照不用稀释。取每个样品后都要更换吸头,准确记录每个样品在板上的位置。每个样品在加入到包被板微孔前应充分混匀。

 

注意事项

1.    试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,使用前应摇匀,使用后放回2~8℃。

2.    不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。

3.    底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。

4.    TMB(底物B液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5.    检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2~8℃)。

6.    所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7.    严格遵守操作说明可以获得最hao的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

8.    血清稀释板为一次性用品,不得重复使用;血清稀释板的最大容量为300μl/孔。

 

操作步骤

1.    取预包被的检测板(根据样品多少,可拆开分次使用),将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。同时设阴性、阳性及空白对照各1孔,取阴性及阳性对照各100μl

分别加入反应孔中,空白对照仅加入100μl样本稀释液。轻轻振匀孔中样品(勿溢出)。

2.    盖上封板膜,置37℃温育30分钟。

3.    小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,用洗涤液洗3次。每次用洗涤液注满板孔(约350μl),静置1分钟后甩掉。洗涤3次后在干净吸水纸上拍干。

4.    每孔加酶结合物100μl,盖上封板膜,置37℃温育30分钟。

5.    小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤3次, 方法同2。切记最后在干净吸水纸上拍干。

6.    每孔先加底物A液50µl、再加底物B液50µl,混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。

7.    每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。

 

结果判定

以空白对照调零用酶标仪于450nm(630nm作参比波长)读取吸光度A值。试验成立的条件是阳性对照孔A450值大于或等于0.5,阴性对照孔A450值必须小于0.15。如果试验无效,试验中的操作值得怀疑,试验应重做,并仔细检察各组分。

样品A450值大于0.15+阴性对照孔均值,判为阳性;样品A450值小于0.15+阴性对照孔均值,判为阴性;如阴性对照孔均值小于0.05按0.05计算。

 

有效期

贮存方法: 2 - 8ºC下贮存。

有效期: 12个月。

 

 

从2011年开始我们致力于在生命科学领域、生物医学实验外包及论文润色服务,协助客户各类实验服务及论文润色,是客户您值得信赖的科研合作伙伴!

如果您受时间、试验条件等限制而无法完成您的课题研究,欢迎您与我们联系。

实验代做服务:

 

WB服务

油红O染色

透射电镜服务

扫描电镜服务

RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)

HE染色

细胞Hochest凋亡染色

石蜡冰冻切片TUNEL凋亡荧光

免疫荧光染色

PAS糖原染色

番红O固绿染色

 

维多利亚蓝染色

免疫组化(IHC)

免疫细胞化学ICC

染色质免疫沉淀CHIP

 

染色质免疫沉淀分析(CLIP)

网状纤维染色银染

石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡

琼脂糖凝胶电泳

 

EVG染色实验服务

CBA流式多因子

Taqman探针合成

酪蛋白酶谱MMP(3/10)

蛋白双向2D-WB

NF-KB p65活性检测

内毒素清除

细胞粘附实验

免疫共沉淀(Co-IP)实验

 

细胞荧光染料标记

临床医生、硕博研究生整体课题协助/设计

 

 

 

杭州研谨生物科技有限公司(www.yanjinbio.cc)主营:wb代做,蛋白双向(2-D)电泳,半定量RT-PCR,PKC活性检测,明胶酶谱MMP,免疫共沉淀,流式多因子检测,CCK8代做

邮箱:hzyanjinbio@163.com

地址:杭州市钱塘区中豪七格商业中心1幢1615

版权所有 © 2022 杭州研谨生物科技有限公司   备案号:浙ICP备2022007326号-1  管理登陆  技术支持:化工仪器网  sitemap.xml

在线咨询 在线咨询 联系方式 二维码

服务热线

400-665-0203

扫一扫,关注我们